细胞冻存的注意事项,细胞冻存试剂有哪些品牌推荐
细胞冻存的原理
细胞冻存的基本原理是利用低温环境抑制细胞的新陈代谢,使细胞进入一种“休眠”状态。在低温条件下,细胞的生物活动几乎停止,从而实现长期保存。然而,细胞在冷冻过程中可能会因为细胞内外水分结冰形成冰晶而受损。为了避免这种情况,通常在冻存液中加入冷冻保护剂,如甘油或二甲基亚砜(DMSO),这些物质可以降低溶液的冰点,减少冰晶的形成,从而保护细胞。
细胞冻存的步骤
细胞收集:收获健康、生长状态良好且处于对数生长期的细胞。对于贴壁细胞系,尽可能收获细胞汇合度接近80-90%的细胞。
消化细胞:用胰蛋白酶/EDTA 消化贴壁或半贴壁细胞,并用至少相当于胰蛋白酶体积的新鲜培养基重悬细胞。悬浮细胞系可直接使用。
配制冻存液:根据细胞类型,配制含有适当浓度的冷冻保护剂和血清的冻存液。
细胞悬液制备:在冷冻培养基中以每毫升2-4x106个细胞的浓度重悬细胞。
分装:将细胞等分移液到贴有标签的冻存管中,标签须注明细胞名称、传代数、细胞浓度和日期等信息。
冷冻:按照一定的降温速率将细胞冻存管放入-80℃冰箱或液氮罐中,常见的降温速率为每分钟1-3℃。
长期储存:将冻存管转移到液氮罐的气相中(-196℃)并记录位置。
细胞冻存的注意事项
• 确保细胞在冻存前未受污染,且处于健康状态。
• 选择合适的冷冻保护剂,并按照推荐的浓度使用。
• 控制好细胞的密度和冻存液的体积。
• 冻存管应正确标记,避免信息错误。
• 冻存过程中避免快速的温度变化,以防细胞损伤。
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科普小知识
D2653-5X5ML和D2653-5X10ML采用的安瓿瓶(Ampules)采用火焰熔封(Flame Sealed)的包装形式具有多方面的优势,主要体现在以下几个方面:
密封性极佳:火焰熔封是通过高温使安瓿瓶口玻璃融化并密封,能够形成一个完全密闭的空间,确保内部所装药品或试剂等与外界空气、水分、微生物等完全隔离,有效防止药品被氧化、受潮、变质,保证药品在储存和运输过程中的稳定性和质量,延长内容物的有效期。
无菌保障:在火焰熔封前,安瓿瓶通常会经过严格的清洗和高温灭菌处理,而火焰熔封过程本身也具有一定的杀菌作用,进一步确保了包装内部的无菌环境,最大程度减少内容物被微生物污染的风险,特别适合包装对无菌要求极高的注射剂、疫苗等药品。
化学稳定性好:安瓿瓶一般采用硼硅玻璃等材质,具有很高的化学稳定性,不易与所装的药品或试剂发生化学反应,不会影响内容物的性质和疗效。火焰熔封不会改变玻璃的化学性质,能始终保持对内容物的良好兼容性,可安全地用于包装各种化学性质的药品或试剂。