Fura Red AM，Cell Permeant钙离子探针使用说明
一、试剂描述
Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，可通过显微光度术、成像来比率法测定单细胞内的Ca2+水平。
Fura Red，AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，简单培养后，便可轻易进入细胞。
进入细胞内会被内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。
Fura Red，AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用，可以用长激发波长。
比起传统的紫外或近紫外激发的比率型探针，对细胞造成的伤害变小。
二、物理参数
【英文名称】：Fura Red，AM，Cell Permeant
【中文名称】：钙离子荧光探针FURA RED，AM
【CAS NO】：149732-62-7
【分子式】：C47H52N4O24S
【分子量】：1088.99
【状态】：红棕色结晶性粉末
【Ex/Em】：471/652 nm（Ca2+-free），436/630 nm（Ca2+-bound）
【溶解性】：溶于DMSO（5mM）
【纯度】：≥95%
【储存条件】：-20℃避光干燥
三、使用方法
A， 试剂准备
1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20%DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。
2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液
B， 操作步骤
1） 用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。
2） 准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入20% Pluronic F-127溶液，可增强AM探针的水溶性。
3） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。
4） 如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒或磺吡酮可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。
5） 将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。
6） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液清洗细胞1~2次，以去除残留探针。
7） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM去酯化。
8） 可用激发/发射波长来检测荧光。
四、试剂结构
五、注意事项
（1）荧光染料存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
（2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
（3）Fura Red, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。
（4） Fura Red, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。
（5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
六、相关试剂
Enhanced Potassium Green-4 AM
BODIPY 505/515，CAS：21658-70-8
脂膜荧光探针C-Laurdan，959839-06-6
Cal-520 Potassium Salt，钙离子荧光探针
DAF-FM DA-氧化氮荧光探针，254109-22-3
Cal-630 Potassium Salt钙离子荧光探针
Cal-520 AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
Cal-590 AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
Cal-630 AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
Fluo-4，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
Fluo-8，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
Rhod-2，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
Rhod-4，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针
本文章（以上资料）由西安强化生物科技xxn编写！
特别提示：该试剂仅供科研机构实验室使用，严禁用于临床诊疗及食品领域！